Bauzeit: 12. Jahrhundert - 1898

Höhenlage: ca. 214 m ü. NHN

Die Nikolaikirche ist eine evangelischen Pfarrkirche und steht unter Denkmalschutz. Sie wurde im 14. Jahrhundert erbaut, aber erst durch Wilhelm Röttscher bekam sie in den Jahren 1897–1898 ihre heutige regelmäßige Gestalt.

Die dreischiffige Hallenkirche ist die bedeutendste und größte unter den Vorstadtkirchen Mühlhausens und unterstand als Filialkirche der Divi-Blasii-Kirche dem Deutschritterorden. 1763 feierte die Stadt nach dem Siebenjährigen Krieg das Friedensfest in der St.-Nicolai-Kirche, da die innerstädtischen Kirchen unbenutzbar waren.

Ihre drei bemalten Chorfenster sind von besonderer Bedeutung, auch ein Nikolausfenster aus dem 14. Jahrhundert gehört zu dem Ensemble aus der Werkstatt von Alexander Linnemann in Frankfurt. Die Empore sowie die Kanzel, der Altar und die Orgel stammen aus dem Ende des 19. Jahrhunderts.